猪圆环病毒病的临床症状、实验室诊断方法及其防控

   看文网   2020-07-30 00:00:00

  摘要:猪圆环病毒病是全世界普遍存在的危害养猪业的一种主要疫病,在我国也是影响养猪三大疫病中的一种,近几年该病在我国的发病率呈不断升高的趋势。猪感染圆环病毒后,会严重损害机体免疫系统功能,引起免疫抑制,容易出现免疫失败,发生严重的消化系统、呼吸系统疾病,从而使猪发生繁殖障碍,饲料利用率下降,且病死率升高等,给养猪业带来巨大的经济损失。现概述猪圆环病毒病的防控措施。
  关键词:猪;圆环病毒病;临床症状;剖检变化;实验室诊断;药物治疗;免疫预防
  中图分类号:s858.28 文献标识码:b文章编号:2095-9737(2019)11-0114-02
  1 临床症状
  1.1 仔猪断奶后多系统衰竭综合症
  病猪主要是生长发育不良,机体日渐消瘦,贫血、黄疸,呼吸困难,腹股沟淋巴结发生肿大,腹泻。部分病猪出现咳嗽,甚至发生中枢神经异常死亡。还能够继发感染猪瘟、巴氏杆菌病、链球菌病、附红细胞体病等。
  1.2 猪皮炎和肾病综合症
  通常是保育猪和生长育肥猪发生,病猪主要症状是皮肤出现圆形或者形状不规则的隆起,呈红色至紫色深浅不同,但中央呈黑色,一般先是后腿、腹部皮肤出现病变,之后扩散至胸肋和耳部,并逐渐融合形成大的斑块或者条带。病猪症状轻时能够自行康复,但严重时会呈现跛行,体温升高,食欲废绝。
  1.3 繁殖障碍
  妊娠母猪感染后通常会发生流产或者容易产出木乃伊胎、死胎,断奶前病死率升高。
  1.4 呼吸道综合症
  生长育肥猪感染圆环病毒2型(pcv2)后,往往会导致呼吸道感染病原微生物以及混合感染,从而出现呼吸道综合症。
  1.5 肠炎
  猪感染pcv2后,会导致肉芽肿性肠炎,主要症状是腹泻,机体消瘦。
  1.6 中枢神经系统疫病
  猪群感染pcv2后,新生仔猪会出现先天性震颤。
  2 剖检变化
  2.1 淋巴结
  病死猪全身淋巴结都发生程度不同的增生、肿大,且质地变硬,外表有充血、出血或者化脓性病变,切面呈黄白色、白色或者灰白色,其中肺门、颌下、纵隔、腹股沟以及肠系膜淋巴结发生明显病变。
  2.2 主要脏器
  病死猪肝脏颜色发暗,发生肿大、硬化,质地变脆,小叶间出现结缔组织增生;脾脏呈肉样变化,明显肿大;肺脏发生肿胀、气肿、水肿,表现散布有不同数量、不同大小的土褐色实变,间质变宽,质地变硬如橡皮,尖叶、心叶、中间叶、后叶前下部会出现融合性支气管肺炎的病变,呈灰红色或者淡灰色,病变处有明显界限,如同"肉样",严重时呈"胰样变";肾脏呈灰白色,发生水肿,有时被膜下存在白色的坏死灶。
  2.3 消化道
  病死猪的胃黏膜发生水肿,并存在非出血性溃疡,肠壁尤其是結肠、回肠变薄,肠道内存在大量清亮的液体,结肠和盲肠黏膜发生充血和出血。
  3 实验室诊断
  3.1 病毒分离及电镜观察
  取病变组织制成10%的悬液,按每毫升添加100 iu青霉素、100 μg链霉素,混合均匀后放入4℃离心机中,以3000 r/min的速度进行20 min离心,取上清液在dulac细胞中接种。经过6 h用d-葡萄糖胺(300 mmol/l )在37℃条件下处理30 min,继续培养72~96 h,对增殖病毒的细胞反复进行3次冻融,收集细胞病毒液再次接种细胞进行6次传代。取第6代细胞病毒液反复进行3次冻融,添加5 mg/ml tritionl14,在37℃下处理30 min,以3000 r/min进行30 min离心,取上清液放入离心管(有30%蔗糖垫)中,以4500 r/min进行3 h离心,倾去上清液,加入0.01 mmol/l ph值为8.0的et缓冲液进行吹打,收集病毒,使用乙酸双氧铀负染色后置于电镜下观察。
  3.2 间接免疫荧光试验检测
  取第6代细胞病毒液在细胞玻片接种,置于37℃条件下进行24~72 h培养,取出后使用丙酮进行10 min固定;接着在细胞玻片上滴加pcv2抗体,置于37℃下进行温育,经过60 min使用0.15 mol/l pbs溶液进行3次冲洗,自然晾干;然后加入抗猪免疫球蛋白荧光抗体,再置于37℃下进行温育,经过60 min再使用0.15 mol/l pbs溶液进行3次冲洗,自然晾干后放在荧光显微镜下观察。同时,要设置猪pcv2抗体阴性血清对照组以及细胞对照组。
  3.3 间接免疫过氧化物酶技术
  在96孔微量培养板上接种pk-15细胞,长成单层后添加经过10倍稀释的待检猪血清,经过一段时间吸干并进行洗涤,在每孔中添加50 μl hrp标记的兔抗猪igg(1000倍稀释),置于30℃下进行孵育,经过15 min再次吸干洗涤,然后添加50 μl底物溶液,最后终止反应,使用显微镜观察,如果看到棕色感染细胞即判定为阳性。
  4 防控措施
  4.1 药物治疗
  猪感染后抵抗力下降,肠道系统等功能减弱,可取10 ml黄芪多糖注射液和1瓶3万iu猪白细胞干扰素充分混合后肌肉注射, 3~10日龄每头用量为1 ml,断乳仔猪每头用量为2 ml,育肥猪每头用量为4 ml,每天用药1次,连续注射3天,以提高机体抵抗力。如果病猪伴发高热、腹泻、咳嗽,还要在药液中添加头孢唑林钠、林可霉素以及维生素b12,实际用量按照说明书确定,混合均匀后再进行肌肉注射,每天用药1次,连续注射3天。
  另外,病猪可配合使用中药治疗,取150 g黄芪,茵陈、板蓝根各20 g,连翘、党参、金银花各50 g,25 g甘草,每次添加1000 ml水煎煮1 h,共进行3次煎煮,按体重给病猪服用1 ml/kg药液,每天用药1次,连续服用3~5天。
  4.2 免疫预防
  我国使用的pcv2疫苗都是病毒灭活苗,主要是给健康仔猪、后备母猪以及经产母猪接种。新生仔猪通常选择3~4周龄进行首免,经过3周再加强免疫1次,每头注射1 ml;后备母猪在配种前进行2次基础免疫,注意具有3周的间隔,且产前1个月还要进行1次加强免疫,每头注射2 ml;经产母猪采取跟胎免疫,即产前1个月进行1次接种,每头注射2 ml;其他成年猪采取普免,进行2次基础免疫,具有3周的间隔,之后每6个月进行1次免疫,每头注射2 ml。


圆环病毒临床症状实验室诊断方法法子及其



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